葛根芩连片的含量测定研究进展 (2)(二)

由李丽莉,吕轶峰,朱雪妍的发表的《葛根芩连片多成分含量测定的研究》，该文章通过建立葛根芩连片中 14 个特征性成分的HPLC含量测定方法，并测定 11 家生产企业的葛根芩连片含量。

得出结论对11个厂家16 批样品的测定，发现各批次中葛根、黄连、黄芩和甘草中所含指标性成分均有检出，提示各企业均按规定投入相应药味。但各指标性成分均存在一定差异，进一步说明了开展中成药整体控制，多种成分同时测定比用单一指标成分控制中成药质量更可靠。

由于黄芩苷和汉黄芩苷的水解产物为黄芩素、 汉黄芩素，故应以4个成分的总量来控制黄芩的质量。从各厂家的数据发现，黄芩中所含的成分各厂家差异显著，以黄芩中的主要成分黄芩苷为例：含量最高的为26.56 mg·g-1（F厂，批号 130928），含量最低的仅为0.80 mg·g-1（G 厂）相差 30 倍，黄芩的其他 成分黄芩素、汉黄芩素和汉黄芩苷各样品之间差异也 十分显著。究其原因，除制剂过程中工艺控制的差异导致各企业产品差异外，也有可能为投料的差异所 致。传统认为河南承德是黄芩的道地产地，现今内蒙、山西、吉林、云南、四川等均有黄芩出产。据文献报道，不同产地的黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等 有效成分差异显著，野生黄芩与栽培黄芩有效成分也各有高低，为了更好地控制药品的质量，保证药品的安全有效，建议加强对葛根芩连片中黄芩的含量控制。

㈡HPLC 法同时测定葛根芩连片中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量

由袁艺,贾玉梅,包丽昕发表的《 HPLC法同时测定葛根芩连片中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量》，该文以黄连中的有效成分盐酸小檗碱和黄芩中的有效成分黄芩苷为指标性成分，采用高效液相色谱法同时测定了盐酸小檗碱和黄芩苷的含量，该法灵敏、准确、重现性好，可有效控制葛根芩连片的质量。

从实验中可知盐酸小檗碱和黄芩苷分别在264nm和274nm有最大吸收，本实验选用264nm作为吸收波长，使两组分峰面积相近。在筛选流动相时，曾参考文献选用乙睛与磷酸二氢钾溶液混合，结果发现用甲醇与磷酸二氢钾溶液以 45：65 混合时，峰形、分离度、出峰时间与用乙睛效果相近，故选用价格较低的甲醇。2005版药典收载的葛根芩连片质量标准中未规定含量测定方法，本文采用高效液相色谱法，用一种流动相同时测定了两种成分，提供了一种快速、准确、可靠的方法来控制本品的质量。

㈢RP -HPLC 法测定葛根芩连片中葛根素的含量

    由陈红军发表的《RP-HPLC法测定葛根芩连片中葛根素的含量》，文章建立以RP -HPLC 法测定葛根芩连片中葛根素含量的方法 。该方法简便 、快速 、准确 , 可用于该制剂的质量控制。以葛根芩连片 (湖南生物药品有限责任公司 , 批号 :031201 、 040601 、041020)作为实验，从 3 批样品中各取 3 份 , 每份约 0.23g , 精密称定 ,按上述方法制备供试品溶液 。分别精密吸取对照品溶液 (78.32μg ·m L-1 )和供试品溶液各 5μL 注 入液相色谱仪 , 测定峰面积并计算含量。

该实验在选择色谱条件时，发现葛根素对照品溶液和供试品溶液的最大吸收峰均在 250nm 波长处 , 故选择该波长为检测波长。葛根素在选定色谱条件下，色谱峰对称且尖锐 ,保留时间为15.8min 左右，阴性对照在葛根素保留时间处基本无干扰，供试品中葛根素与相邻色谱峰达到完全分离。

该文章采用超声提取方法 , 供试品超声提取时间分别比较了10、20 、 30min , 结果20min 提取的葛根素含量比10min的要高 , 20min 与 30min 提取的含量基本相同，故确定超声提取时间为20min。试验结果表明 ,超声提取 20min ,样品中的葛根素已基本提取完全，且分离效果较好。

㈣高效液相色谱法测定葛根芩连中黄芩苷的含量

   由王小龙发表的《高效液相色谱法测定葛根芩连片中黄芩苷的含量》，该试验通过采用H P L C 法测定了葛根芩连中主要黄酮类成分黄芩苷的含量，以黄芩苷片（产地河南，3个批号)为实验，分别按样品溶液的制备方法处理，分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各20μL在上述色谱条件下测定黄芩苷含量，结果如下表：

从而看出高效液相色谱法测定葛根芩连片中黄芩苷的含量, 方法简便,准确,重现性好，可作为质量检验的一个定量方法。

总结

通过高效液相色谱法，将葛根芩连片进行多成分含量测定，从数据发现，黄芩中所含的成分各厂家差异显著，不同产地的黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等有效成分差异显著，野生黄芩与栽培黄芩有效成分也各有高低，为了更好地控制药品的质量，保证药品的安全有效，建议加强对葛根芩连片中黄芩的含量控制。同时测定主要药味葛根和黄连指标性成分葛根素和盐酸小檗碱的含量，可全面体现葛根芩连片组成成分，简化了标准操作又节省了资源，为葛根芩连片的质量控制提供了参考。2015版药典收载的葛根芩连片质量标准中未规定含量测定方法，用高效液相色谱法同时测定葛根芩连片中盐酸小檗碱和黄芩中的有效成分，用一种流动相同时测定了两种成分，提供了一种快速、准确、可靠的方法来控制本品的质量。

同时在特征图谱的评价系统中提出了以双标峰相对保留时间定位法进行特征峰定位，有效地解决了目前中药复方成分复杂导致色谱系统波动引起色谱峰漂移所导致的特征峰定位困难的问题，为中药特征图谱评价系统提供新的思路。高效液相色谱法测定葛根芩连片中黄芩苷的含量, 方法简便,准确,重现性好，可作为质量检验的一个定量方法。

参考文献：

[1]李丽莉,吕轶峰,朱雪妍. 葛根芩连片多成分含量测定的研究[J]. 药物分析杂志,2017,37(09):1607-1614.

 [2]袁艺,贾玉梅,包丽昕. HPLC法同时测定葛根芩连片中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量[J]. 中国伤残医学,2007(01):25-27.

 [3]陈红军.RP-HPLC法测定葛根芩连片中葛根素的含量[J]. 中国药房,2007(18):1408-1409.

 [4]王小龙. 高效液相色谱法测定葛根芩连片中黄芩苷的含量[J]. 时珍国医国药,2004(04):197.

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