栀子及其制剂中栀子苷含量测定方法研究进展(二)

栀子中含有大量的栀子苷，具有清热降火等作用。从栀子中分离提取栀子苷的方法有很多，常用的提取方法有溶剂提取法、超声波提取技术和超临界流体萃取技术等。

（一）溶剂提取法

选用适合的溶剂将中药材和中成药中的待测成分溶出的方法称溶剂提取法。所谓适合的溶剂就是对待成分溶解度大，对不需要的成分溶解度小或不溶的溶剂。中药中的化学成分在溶剂的溶解度与溶剂性质有关，一般遵循“相似相溶”的原则，通过对待测主成分的结构分析来选用合适的溶剂。如苷类比其苷元的亲水性强，苷往往由于分子中结合多个糖分子，羟基数目多，故有较强的亲水性，可选用极性较强的溶剂提取，而苷元则为亲脂性强的化合物，较多用极性小的溶剂提取。一般选用溶剂时，要求溶剂对待测成分溶解度大，而杂质溶解度小，所选择溶剂不能与中药中待测成分起化学变化，溶剂要求易得，使用安全。

1.乙醇提取法

由于乙醇的性质能溶解很多成分，因此我们采用乙醇浸润法，对化学物质进行分离操作。由于乙醇是常见易得的化学溶剂，在化工医药行业的提纯和制备中广泛应用。同样，栀子中的栀子苷也可以用乙醇来提取。

2.乙醚提取法

一般乙醚提取是利用溶剂回流和虹吸原理，加入乙醚反复进行回流，最后多次提取，将回流后的残留物溶于乙醇中，经过过滤器过滤，将不溶物除去，减压干燥就可以得到栀子苷。

3.水提取法

水是一种常见、容易获取、对细胞穿透力强的强极性溶剂。水提取法追溯的年代比较久远，但至今仍为提出的常用方法。主要做法是将要提取的物质和水按一定比例混合，然后煮沸得到液体，最后采用一定方法进行提取。由于栀子苷本身的特性，在水溶剂中很好地分离出来，因此我们也可以采用水提取法对栀子中的栀子苷进行提取。

（二）超声波提取技术

超声波是一种机械波，其具有频率高、波长短、功率大、穿透能力强的特点。超声波技术是将超声波产生的空化、振动、粉碎、搅拌等综合效应应用到天然产物成分提取工艺中，通过破坏细胞壁，增加溶剂穿透力，从而提高提取率和缩短提取时间，达到高效、快速提取化学物质的技术，一般用于中草药的提取，对于栀子中的栀子苷同样适用。

（三）超临界流体萃取技术

超临界流体一般是稍微超过物质本身的临界温度和临界压力状态的流体，即在临界点附近。超临界萃取以超临界流体为萃取剂，在临界温度和压力附近的条件状态下，从液体或者固体物质中萃取出带分离的组份，一般用于食品，药物和化工行业中。

三、含量测定方法简介

（一）紫外分光光度法

分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法，常见的波长范围为紫外光谱区（UV）、可见光谱区（VIS）和红外光谱区（IR），研究物质在紫外光谱区吸收光谱的分析方法称为紫外分光光度法。

相关其他光谱分析法来说，紫外分光光度法具有简单、快速，灵敏度高，选择性好，精密度和准确度较高，在仪器设备和其他测量条件较好的情况下，其相对误差可低至1%-2%，同时由于紫外分光光度法不需要显色剂，不受显色剂、温度及显色时间等因素的影响。由于上述种种优点，使得紫外分光光度法在中药分析中应用广泛，近年来由于物理化学、电子学、计算机科学等的发展，使得紫外分光光度法的理论和应用得到了进一步的拓展。

（二）高效液相色谱法

高效液相色谱法起源于经典液相色谱法，是现代分析化学中最重要的分离分析方法之一。经典液相色谱法由于使用粗颗粒填料作为固定相，并靠重力使流动相流动，因而柱效低，分离周期长，而高效液相色谱相比经典液相色谱，具有高效、高速、高灵敏度、高自动化等特点。高效液相色谱法具有应用范围广的优点，主要表现在，HPLC不受试样挥发和相对分子质量的限制，可用于分离高沸点、相对分子量较大、热稳定性差的有机化合物，还可用于各种离子的分离；不仅可利用被分离组分的极性差别，还可利用组分分子尺寸大小的差别、离子交换能力的差别以及生物分子间亲和力的差别进行分离；HPLC易于收集流出物组分，可利用制备柱进行较大量的制备。以上优点使得HPLC在色谱法中占有日益重要的地位，并且成为中药分析中不可缺少的一种分离分析方法。

四、含栀子制剂中栀子苷的含量测定实例

（一）小儿豉翘清热颗粒中栀子苷含量的测定

小儿豉翘清热颗粒为棕褐色颗粒，味甘、微苦，具有疏风解表、清热导滞的作用，主要用于小儿风热感冒夹滞证。它的主要成分为栀子、连翘、淡豆豉等。李伟等采用紫外分光光度法测定了小儿豉翘清热颗粒中栀子苷的含量，该测定用到的试剂和药品有小儿豉翘清热颗粒、栀子苷对照品、甲醇、异丙醇和柠檬酸等，用到的仪器有紫外分光光度计、超声波清洗器和电子天平等。然后制备对照品溶液和供试品溶液，确定了最大吸收波长为228nm，分别取一定梯度的测试溶液和对照品溶液进行测定，栀子苷在0.52-2.60ml-1范围内供试品溶液、阴性溶液、栀子苷的吸收度与溶液浓度之间均具有良好的线性关系。结果表明紫外分光光度法操作简单，结果准确可靠，重现性好，可以用来测定小儿豉翘清热颗粒中栀子苷的含量。

（二）高效液相色谱法测定解热消炎胶囊中栀子苷含量

解热消炎胶囊系由胆酸、黄芩苷、栀子提取物等组成的复方制剂，具清热解毒，镇惊安神之功效，主要用于外感风热引起的发烧，咽喉肿痛，扁桃腺炎，咽炎等症。黄聪燕等采用高效液相色谱法测定解热消炎胶囊中栀子苷的含量，该测定用到的试剂和药品有解热消炎胶囊、栀子苷对照品、乙腈和纯化水，用到的仪器有高效液相色谱仪、色谱工作站和电子天平。然后对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，确定了色谱条件，选用Aichrom C18(250 mm×4.6mm,5μm)色谱柱，乙腈-水(15：85)为流动相，检测波长238 nm，流速1 ml/min。进行了色谱仪稳定性试验，最后进行了含量测定，此方法简便、准确、重现性好，可用于测定解热消炎胶囊中栀子苷含量。

（三）小儿退热合剂中栀子苷含量测定

小儿退热合剂由连翘、金银花、板蓝根、黄芩、栀子等中药组成，具有疏风解表，解毒利咽的功效。聂聪珍等采用高效液相色谱法测定小儿退热合剂中的栀子苷的含量，该测定用到的试剂和药品有小儿退热合剂、栀子苷对照品、甲醇和纯化水，用到的仪器有高效液相色谱仪、色谱工作站和电子天平。然后对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，确定了色谱柱：AgilentZORBAX SB -C18色谱柱 (4.6mm×250mm，5μm )；检测波长：238nm；流动相：甲醇-水 (20：80)；流速：1m L/min；柱温25℃，接着进行了线性关系考察，最后进行了含量测定。该方法准确、简单、重复性好，可用于测定小儿退热合剂中栀子苷的含量。

五、栀子及其制剂中栀子苷的含量测定方法总结

目前栀子的含量测定方法主要有紫外分光光度法和高效液相色谱法。紫外分光光度法，由于不受显色剂、温度及显色时间等因素的影响，且检测快速、准确，可适用于栀子及其制剂中栀子苷的含量测定，测定过程中一般采用228nm为测定波长，从供试品溶液吸收值和阴性溶液吸收值之差求得供试品溶液中栀子苷的吸收值，从而测定栀子苷的含量，紫外分光光度法方法简单，结果准确可靠，重现性好，可用于质量控制。

高效液相色谱法，由于栀子苷为环烯醚萜苷类化合物，测定过程中一般采用采用C18色谱柱，流动相以乙腈和甲醇为主，检测波长为238nm，流速1ml/min，测定栀子苷的含量，高效液相色谱法操作简便、准确、重现性好。近年来，随着高效液相仪器的进一步普及，运用高效液相色谱法测定制剂中栀子苷的含量居多。

参考文献

[1]李葆华，栀子的研究概况[J]，《时珍国医国药》，2004年06期

[2]马滕，韩敏彩，苏健，王宝琴，栀子及其制剂中栀子苷含量测定方法研究进展[J]，中国中医药信息杂志 ，2005年07期

[3]李伟，钟世华，小儿豉翘清热颗粒中栀子苷含量的测定[J]，《中医药导报》 ，2009年12期

[4]黄聪燕，李兵，郭环娟，高效液相色谱法测定解热消炎胶囊中栀子苷含量[J]，《今日药学》，2008年01期

[5]聂聪珍，高效液相色谱法测定小儿退热合剂中栀子苷的含量[J]，《中国医药指南》，2013年14期