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贝复济(bFGF)冻干粉针的制备及质量控制(一)
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贝复济(bFGF)冻干粉针的制备及质量控制
摘要
碱性成纤维细胞生长因子,英文Basic Fibroblast Growth Factor的英文缩写bFGF,是人生长因子中的一种,由155个氨基酸组成的相对分子量为16~18.5 KD。,能促进中胚层和神经外胚层细胞分裂的多肽。其在医药和美容方面有广泛的应用如:
1.其主要生物学作用有:(1)作为血管生长因子。(2)促进创伤愈合与组织修复。(3)促进组织再生。(4)参与神经再生等。
2.在美容方面,具有以下作用:(1)bFGF能够改善细胞生长的微环境,促进弹性纤维和胶原蛋白的合成,使肌肤富有弹性,使皮肤处于滑嫩的状态。(2)抗皱、防衰老作用,能够促进成纤维细胞的生长发育,不断以新的细胞取代老化细胞,因此产生防皱、祛皱作用。(3)美白、祛斑作用,更新衰老细胞,从而降低皮肤细胞中黑色素和有色细胞的含量,减轻皮肤色素的沉着。(4)防晒及晒后修复作用,能迅速修复受损细胞,减轻紫外线辐射对皮肤造成的伤害。(5)防粉刺、去疤痕作用。
现代采用基因工程方法人工合成bFGF,采用独特的色谱技术分离纯化提取bFGF。采用冻干制备bFGF冻干粉针。真空冷冻干燥技术简称冻干技术,运用此技术的设备称为:真空冷冻干燥机或者冻干机。
真空冷冻干燥的过程中在低温的环境下,同时在加工的过程中必须要使得周围的环境处于高真空的状态,所以这种加工方式非常适用对热敏感度高和非常容易出现氧化问题的物质的干燥,冻干技术有它的独特优点:(1)它是在低温下干燥,不容易使蛋白质、微生物之类产生变性或失去生物活力,这对于那些热敏性物质,如疫苗、菌类、毒种、血液制品等的干燥保存特别适用。(2)由于是低温干燥,使物质中的挥发性成分和受热变性的营养成分损失很小,特别是化学制品、药品和食品的优质干燥方法。(3)在低温干燥过程中,微生物的生长和酶的作用几乎无法进行,能最好地保持物质原来的性状。(4)干燥后体积、形状基本不变,物质呈海棉状,无萎缩;复水时,与水的接触面大,能迅速还原成原来的性状,复水性好。(5)因系真空下干燥,氧气极少,使易氧化的物质得到了保护。(6)能除去物质中95~99%的水分,更有利于制品的长期保存。
宋体小四号行文,字数约300字。
关键词 碱性成纤维细胞生长因子;氨基酸;多肽;真空冷冻干燥
引言
正文要求论点明确、结构合理、条理清楚、内容完整、资料翔实并与论点相结合,同时要做到文字通顺,引文规范。
非英语专业毕业论文字数要求5000字以上,正本用A4纸写作,用宋体小四号行文,且行距为“固定值”的18磅。
注释应放在相应每一页的最下面,即采用脚注形式。与参考文献的格式一致外,还应注明页码。脚注一律用小五号宋体字。
第1章文献综述
1.1对bFGF的研究
成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor, FGF)是一类对源于中胚层和神经外胚层的多种类型细胞具有促分裂分化活性的多肽生长因子,包括酸性成纤维细胞生长因子(Acidic FGF,aFGF)和碱性成纤维细胞生长因子(Basic FGF,bFGF)等多个成员(冯秀萍,曲红艳,田海山,2008)。aFGF 可促进血管生长、伤口愈合、眼角膜上皮和内皮损伤修复、眼晶状体再生、神经组织修复等(马艳,金小宝,朱家勇,2006)。而bFGF 对多种细胞的生长、分化及功能有作用,可促进细胞中胚层源和神经外胚层源的大部分细胞有丝分裂,还能改变大量细胞非有丝分裂的功能,生物学效应广泛,已应用于临床皮肤创伤和角膜外伤的修复(卢建香,2003)。
1.1.1输入三级标题
图表格式:
每个表都应有表说明,表说明包含表序与表题,居中排印在表的上方;表序与表题之间空一字距;独表表示也同样要求;表与表说明不能破页。
表中不设“备注”栏,需要说明的事项可排印在表下方,表内用星号“*”或圈码“①、②”标注在相应内容的右上角。表中的参数应表明量和单位的符号,如表中所有参数的单位相同,可标注在表的右上方或表说明之后;各栏单位不同则应标注在各栏表头内。表中不能用“同上”、“同左”一类词代替具体数字;无某项目则空白;未发现用“...”;结果为零用“0”;同一栏的数字必须按位次上下对齐。
表随正文,先见文字后见表;需要转页的表,应在续表的右上角或左上角注明“续表×”,并应重复排印表头。
图表与上下文之间各空一行。
表1-1样本:
表11 简单的多描述分配表
描述1
ζR
(1−ζ)R
描述2
ζR(重复)
(1−ζ)R
描述3
ζR(重复)
(1−ζ)R
脚注就是可以附在文章页面的最底端的,标明引用文献或者对某些东西加以说明,印在书页下端的注文。脚注使用方式,例如[温诗铸. 摩擦学原理[M]. 北京:清华大学出版社. 2003:98]
1.2对bFGF制备的研究
刘士德, 张建华, 秦志宏, 余玉雯, 邢苗(2003)应用基因重组的牛bFGF 免疫BALB/ c 小鼠, 通过细胞融合, 建立分泌抗bFGF mAb 的杂交瘤细胞株。应用免疫沉淀技术鉴定抗bFGF mAb 的亚类;应用基因重组的牛bFGF免疫青紫蓝兔, 制备抗bFGF 的多抗血清;将抗bFGF mAb及兔抗血清用Pro tein A 亲和层析纯化后, 建立检测bFGF 含量的ELISA 方法。
杨洪存,曲悦,冯秀萍(2009)以卡波姆940、甘油、1,2 丙二醇为基质,加入复方保护剂(肝素钠、人血白蛋白、甘露醇和HP-β-CD),制成bFGF 凝胶剂,观察25 和4℃保存的稳定性,并进行家兔局部刺激试验、急性毒性试验、促烧伤创面愈合试验。结果bFGF 凝胶剂在25℃保存18 个月、4℃保存24 个月,效价维持在原效价的80%以上;局部用药未见皮肤刺激反应和急性毒性反应;促家兔烧伤创面愈合的效果明显优于水溶液剂。制备的bFGF 凝胶剂安全有效,具有缓释作用,稳定性良好,具有广阔的临床应用前景
王建华,李学敏,陶晓军等(2011)制备交联风干胶原膜和交联冻干胶原膜。将壳聚糖-肝素纳米粒滴于交联冻干胶原膜上,再将湿态交联风干胶原膜置于复合纳米粒子的交联冻干胶原膜上风干,即碱性成纤维细胞生长因子/双层胶原基复合材料。采用急性全身毒性试验、溶血试验、热原试验和细胞毒性试验评价其生物安全性。结果,碱性成纤维细胞生长因子/双层胶原基复合材料为双层结构,一侧表面致密,另一侧疏松多孔。在其中间负载碱性成纤维细胞生长因子的壳聚糖-肝素纳米粒子呈不规则球形分布于胶原膜内侧面;急性全身毒性试验、热原试验、溶血试验均为阴性,细胞毒性为0 级。说明碱性成纤维细胞生长因子/双层胶原基复合材料具有良好的生物安全性,对机体无毒,符合ISO 10993-1 评价标准。
陈勇,王振远(2013)采用壳聚糖为主要辅料制备涂膜剂,用二奎琳甲酸试剂盒测定制剂中bFGF 的含量,并进行皮肤刺激性实验。制备的涂膜剂中bFGF 检测浓度线性范围为1~25 μg/mL(r = 0.999 7),平均回收率为100.4%,RSD 值为1.15%(n = 5)。该制剂制备工艺简单,含量控制准确,无皮肤刺激性。
沈彬,何勤,段宏等(2004)以聚乳酸一聚乙二醇共聚物为包裹材料, 采用复乳包囊法制备bFGF 一聚乳酸一聚乙二醇共聚物缓释微球, 并对微球的形态学、粒径分布、载药量、包封率和体外释药等进行研究。所制备的微球表面光滑圆整, 球体均匀度好; 微球平均粒径为1 .543 ±0.070um,平均径距为1.273 ±0.08 ;载药量和包封率分别为0.026 7 % 和65.32 % ; 微球的体外释药过程较为稳定, 两周释药率为59.98 %。bFGF缓释微球比bFGF有明显的缓释作用。
贝复济(bFGF)冻干粉针的制备及质量控制
2.1.贝复济(bFGF)冻干粉针的制备与结果
2.1.1材料和仪器
采用bFGF原液,人血白蛋白,甘露醇,注射用水,卤化丁基橡胶塞(溴化),2ML西林瓶,TOFFLO-5冻干机,KJCS-2ES全自动湿法超声波胶塞清洗机,SHZ-X西林瓶清洗机,H-GMS-B热风循环隧道烘箱,过滤器,配液罐,缓冲罐,SHZ-YGX-1灌装机。
2.1.2灭菌条件
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