黄连及其制剂中生物碱类化合物的HPLC测定方法概述(三)

俞永梅，牟娜，张平选用甲醇、乙酸乙酯和三氯甲烷3种不同提取溶剂，加酸与不加酸以及酸的用量，超声、回流等不同提取方法，过中性氧化铝柱与不过柱对提取效率的影响。结果用甲醇-盐酸(100∶1)超声30min后过中性氧化铝柱能将药材中的生物碱提取完全，且杂质较少。分别考察了不同流动相(乙腈-磷酸二氢钾系统、乙腈-庚烷磺酸钠与磷酸二氢钾系统及乙腈-0.1%磷酸溶液系统)用磷酸调不同pH值、不同柱温、不同检测波长下3种生物碱与其他成分的分离情况。因药根碱含有酚羟基，流动相制备时应注意控制pH值，使得盐酸药根碱与相邻的峰达到分离要求，且峰形较好。结果以乙腈-2.5mmoL·L－1庚烷磺酸钠和50mmoL·L－1磷酸二氢钾溶液(含0.14%三乙胺，磷酸调pH至3.0)=27∶73，检测波长为348nm，柱温35℃时，基线平稳，分离较好。盐酸小檗碱、盐酸药根碱、表小檗碱与相邻的峰都达到分离的要求，峰形较好。综上所述，高效液相色谱法测定黄连上清片中3种生物碱法测定黄连上清片中盐酸小檗碱、盐酸药根碱、表小檗碱的含量，方法灵敏、准确、专属性强，重复性好，可作为黄连上清片的质量控制方法。

（三）HPLC测定黄连上清片中黄连素的含量

黄连降糖片为开封市某医院自制制剂，由黄连、酒大黄、知母、麦冬、地黄、牡丹皮组成，具有清热生津、降糖止渴的功效，主治热盛津伤型消渴病。方中黄连清热保津、泻火解毒，是为君药，其有效成分为小檗碱。张健，张蒙蒙采取HPLC法，采用C18(250mm×4．6mm，5μm)，以乙腈－磷酸盐缓冲液［0．05mol/L磷酸二氢钾溶液和0．05mol/L庚烷磺酸钠溶液(1∶1)，含0．2%三乙胺，用磷酸调pH值至3．0(41∶59)为流动相，流速1．0mL/min，检测波长263nm。分别精密量取对照品溶液2，5，10，20，30，40μL，μL，按上述色谱条件进行分析，以对照品进样量(X，mg/L)对峰面积(Y)作线性回归，回归方程为:Y=82．40X－0．035(Ｒ=0．9995)。盐酸小檗碱在0．076～1．528μg范围内进样量与峰面积值呈良好线性关系。取同一批样品，，分别测定盐酸小檗碱含量，平均含量为34．77mg/片，ＲSD为0．6%，表明本方法重复性良好。

四、总结

总之，本实验所得方法操作简便，并经过了方法学验证，结果表明，本方法有较好的专属性，精密度好，准确度高，并有良好的重现性，提取回收率接近100%，可以作为复方黄连素片中盐酸小檗碱的含量测定，用于该制剂的质量控制，以确保其临床用药效果。

参考文献：

1.谢进,韩晋,张诗龙等.黄连不同部位中5种生物碱的含量比较[J].解放军药学学报,2011,27(2):124-127.

2.张霞,徐力生等.宁夏不同产地野生与种植甘草中甘草甜素含量的比较[J].宁夏医科大学学报,2018,34(6):545-547.

3.吴海,易伦朝等.野生与人工栽培麻黄不同部位成分的比较研究[J].中草药,2017,38(9):1298-1301.

4.向莉,李盾.HPLC法研究黄连中表小檗碱等五种生物碱的含量[J].成都中医药大学学报,2014,(2):46-48.

5.周利,杨健,詹志来等.不同产地黄连中重金属的含量测定及不同用药方式下黄连重金属的风险评估[J].药学学报,2018,(3):432-438.

6.宫涛,魏盼盼等.黄连规范化栽培方法[J].特种经济动植物,2014,(11):37-39.

7.尹清.HPLC测定黄连中盐酸小檗碱含量[J].上海中医药杂志,2013,(7):53-55.

8.武小赟,李铁钢等.HPLC法测定黄连中主要生物碱的方法学研究[J].上海中医药杂志,2017,(6):112-115.

9.曾烨,王学奎等.湖北利川黄连不同生长龄期主要生物碱的分布及变化[J].中国实验方剂学杂志,2013,(11):123-126.

10.汪寒林. HPLC 法测定黄连上清片中盐酸小檗碱的含量[J].安徽医药，2005，9

11.俞永梅，牟娜，张平. 高效液相色谱法测定黄连上清片中3 种生物碱[J].中成药，2012，34( 5) : 861-864.

12.张健，张蒙蒙.高效液相法测定黄连降糖片中盐酸小檗碱含量 [J].中医研究.2019（06）:115-116..