栀子及其制剂中主要成分的含量测定方法概述(二)

2.1.3薄层一紫外分光光度法以及测定实例。

紫外-可见分光光度法是在190～800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。因此，可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。薄层层析又称薄层色谱，色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种重要实验技术，属固—液吸附色谱，兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。是将吸附剂、载体或其他活性物质均匀涂铺在平面板（如玻璃板、塑料片、金属片等）上，形成薄层（常用厚度为0.25毫米左右）后，在此薄层上进行层析分离的分析方法。

薄层一紫外分光光度法是有薄层层析和紫外-可见分光光度法组合使用的一种分析方法。

测定实例--《栀子药材中京尼平苷含量的薄层-紫外分光光度法测定》

目的：建立薄层-紫外分光光度(TLC-UV)法测定栀子药材中京尼平苷的含量。

方法：在25℃测定京尼平苷在最大吸收波长238 nm处的吸光度。

结果：此法线性范围6.4～38.4 μg/ml内,r=0.999 1,平均回收率为97.68％,RSD=2.72％(n=6)。

结论：用此方法可测定栀子中京尼平苷的含量.方法简便,灵敏和准确,结果可靠.  )。

2.2不同测定方式的优劣。

2.2.1高效液相色谱法优点和劣势。

优点：分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广；

与气相色谱法相比具有不受试样的挥发性和热稳定性限制，应用范围广；流动相种类多，可通过流动相的优化达到高的分离效率；一般室温下分析即可，不需高柱温。

     缺点：分析成本高，液相色谱仪价格及日常维护费用贵，分析时间一般比气相长。

2.2.2薄层扫描法优点和劣势。

优点：操作方便、设备简单、显色容易等特点，同时展开速率快，一般仅需15～20min；混合物易分离，分辨力一般比以往的纸层析高10～100倍，它既适用于只有0.01μg的样品分离，又能分离大于500mg的样品作制备用，而且还可以使用如浓硫酸、浓盐酸之类的腐蚀性显色剂。

缺点：对生物高分子的分离效果不甚理想 [3]。

2.2.3薄层一紫外分光光度法优点和劣势。

优点： 紫外分光光度法与其它光谱分析方法相比，其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快、 灵敏度高、选择性好、用途广泛。薄层分析具有操作方便、设备简单、显色容易等特点，同时展开速率快。薄层一紫外分光光度法继承了俩种测量方式的优点。

缺点：对测定栀子及其试剂成分含量来说准确度不高。

2.3测定栀子及其制剂中主要成分的含量最优的方法介绍。

用高效液相色谱法测定栀子及其制剂中主要成分的含量，此方法专属性强、操作简便、精密度和稳定性良好。

3栀子及其制剂中主要成分的含量测定方法总结。

栀子来源于茜草科Rubiaceae植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实。栀子中含有40余种生理活性物质, 其中为国内外所公认的中药栀子有效成分为环烯醚萜类物质。栀子所含的环烯醚萜类物质包括栀子苷、京尼平苷、羟异栀子苷、栀子苷酸等,其中活性成分最高的是栀子苷和京尼平苷。栀子苷又是生产栀子蓝、栀子红、栀子紫的中间体和生药品的有效单体。因此, 对栀子苷的分离、纯化、结晶和含量测定成为对栀子深度开发的关键技术。目前,对栀子苷的分离可以与α - 藏花素的分离同步进行。较为成熟的方法是采用大孔树脂吸附解吸的技术。选用的树脂多为弱极性和无极性, 如HP20、XAD22、HPD2100、X25 、NKA等等。文献报道栀子苷的提纯方法主要有: 铅盐沉淀法、活性炭除杂法、硅胶吸附法等。通过比较研究得出的初步结论是, 上述方法作为研究尚可,但无法进行工业化生产。其主要问题在于: 工艺复杂、物耗过大、收得率低, 而且大量使用有毒有害的试剂,如乙醚、氯仿、甲醇、丙酮、铅盐等。不符合食品、药品的生产规范。而采用柱层析法则完全可以达到栀子苷纯化的目的。选用安全、无毒、合适的固定相和流动相，在一定的吸附量、温度、pH、流速、流量等条件下, 可以有效地将栀子苷的含量由50%纯化到95%左右, 为栀子苷的结晶创造必要的条件。

 栀子的化学成分比较复杂，主要有栀子苷类、环烯醚类、藏红花苷类等。栀子中提取栀子苷的方法也有多种多样，常见的方法有以下几种：浸取发、超声波萃取技术、超临界流体技术以及微波萃取技术。栀子的主要成分测量的方法有薄层紫外法 、薄层扫描法、高效液相色谱法等[5]，薄层紫外法和薄层扫描法准确度不高, 高效液相色谱法是对栀子苷准确、快速的定量测定方法,为其质量标准的制定[4]。栀子的化学成分决定了栀子的应用范围，栀子在医药中应用广泛，可以用来解热、抗炎、镇静、护肝和凝血等诸多方面的作用，随着提取科技、医药科技等科学技术的发展，栀子中的有效成分将得到更好的发展。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.药典（四部）[M]. 北京：中国医药科技出版社. 2015：52-96

[2] 国家药典委员会.药典（相关品种超高压液相方法分析）[M]. 北京：中国医药科技出版社. 2015：108-296

[3]萃取方法分类报告[J].中医药网，2016 (1):6-65.

[4]栀子及其制剂中栀子苷含量测定方法研究进展[J]..中国中医药信息杂. 2015年7月第12卷第7期:2-6

[5]梁大同.反相高效液相色谱法测定栀子及其制剂中栀子苷的含量[Z].