白英抗肿瘤研究进展(二)

白英中主要的甾体生物碱有番茄烯胺、澳洲茄碱 、澳洲茄边碱、蜀羊泉碱 、β-苦茄碱等。其中 β-苦茄碱, 又称 β-千年不烂心碱,有抗小鼠移植性 S180肉瘤的作用, 有报道发现 β-苦茄碱 30mg/kg的剂量可使小鼠移植性 S180肉瘤的瘤重从对照组的 1285 mg减至 374 mg,抑制率为78.6%[ 6]。

3 倍半萜类 

白英中含有苍术内酯等倍半萜成分。 RenY等[ 10]从白英中分离出二种新的倍半萜类化合物, lyratolC和 lyratolD, 连同两个已知的倍半萜, dehydrovomifoliol和 blumenol,在进一步的药理实验中发现这 4个化合物对三种人类肿瘤细胞株鼻咽癌 HONE-1、口腔上皮癌 KB和肠癌 HT29细胞均有显著的细胞毒作用[7] 。

（三）白英抗肿瘤成分的提取

白英化学成分复杂 ,提取方法各不相同 ,探索最佳的提取方法也是药理研究的重点。韩氏等[ 11]采用 L9 (34)正交设计法, 分别以浸膏率 、半数有效抑制浓度 (IC 50 )和薯蓣皂苷元的质量分数为考察指标, 对白英提取工艺条件进行筛选 。影响白英提取的主要因素有 A乙醇体积分数(25%、50%、75%)、B提取次数(1次 、2次、3次 )、C回流时间 (1、1.5、2小时 ),每个因素选择 3个水平进行试验 ,以优选出最佳工艺 。结果:以浸膏率为考察指标时, 优选工艺为 A 2 B 3 C 3 , 其中提取次数对浸膏率有显著性影响;以 IC 50 为考察指标时, 优选工艺为 A 3 B 3 C 1 ;以薯蓣皂苷元的质量分数为考察指标时, 优选工艺为A 2 B 2 C 1 为 佳 。综 合 考 察 , 优 化 水 平 组 合 应 为A 2 B 3 C 1 ,即采用 50%的乙醇 、提取 3次 ,每次 1小时为最佳工艺。

二、白英抗肿瘤作用机制研究

（一）抑制肿瘤生长

孙氏等研究白英水提物对 S180肉瘤和肝癌H22荷瘤小鼠体内抗肿瘤的作用 ,发现中 、高剂量组对小鼠 S180肉瘤和肝癌 H22的抑制作用明显 , 且呈现良好的剂量-效应关系。朱氏等 发现白英含药血清能明显抑制体外培养的 A2780、Hela、SGC-7901细胞的生长 。进一步体内实验发现, 白英高 、中 、低剂量组对小鼠 S180肉瘤的肿瘤抑制率分别为37.4%、12.6%、7.9%;对 H22移植性腹水癌小鼠的生命均有一定的延长, 延长率分别为 31.7%、23.0%、14.4%,其中高、中剂量组的抑制率达到或接近30%以上。

（二）诱导细胞凋亡

细胞凋亡又称为程序性细胞死亡 ,它的特征是细胞膜保持完整性, 而核染色质固缩 ,内源性内切酶激活, 将染色质 DNA降解成寡聚核小体, 电泳带谱特征表现为呈梯状带 , 这与细胞死亡有本质区别 。许多证据表明, 肿瘤的发生与细胞凋亡的调节紊乱有密切关系 。正常情况下, 细胞增殖和凋亡达到一种平衡稳态 ,一旦细胞的增殖或凋亡发生异常 ,这种平衡稳态失调可导致细胞恶性增殖形成肿瘤 , 而促进肿瘤细胞凋亡可达到使肿瘤缩小 ,癌症消退的目的 。所以, 诱导肿瘤细胞凋亡是防治恶性肿瘤的一个重要方法 。大量实验证明 , 白英能诱导多种肿瘤细胞凋亡, 其机制可能为通过影响凋亡调控因子来诱导肿瘤细胞凋亡。参加肿瘤细胞凋亡调控的基因有正负两类调控因子 ,主要是由 Caspase家族为代表的凋亡活化基因和以 Bcl-2家族为代表的凋亡抑制基因共同控制 。韦氏、涂氏等研究发现白英提取液能抑制人肺癌 SPC-A-1细胞、宫颈癌 Hela细胞、乳腺癌MCF-7细胞增殖 ,且呈剂量依赖 。用 Hoechst33342荧光染色后 ,荧光显微镜观察可见细胞核固缩 ,染色质凝聚 ,染色加深, 呈环形或新月形附于核膜周围 ,或细胞核破碎, 呈大小不等、形态不规则的碎片或呈梅花状 ,表明白英提取液能诱导细胞凋亡 ,且细胞凋亡率随白英提取液浓度增加而升高 。半定量 RT-PCR法检测凋亡相关基因, 认为其机制可能与上调促凋亡基因 fas、caspase-3 、P53,下调抑制凋亡基因FasL、Bcl-2、survivin的表达有关。WanFS等[ 18]通过 MTT法、细胞形态学变化 、流式细胞仪以及半定量 RT-PCR检测, 发现白英提取物对 SGC-7901细胞增殖有显著抑制作用, 且呈明显的时效和量效关系;bcl-xlmRNA表达显著性下降 (P<0.05), caspase-9和 bidmRNA表达有显著。性升高(P<0.05), 并随白英浓度增加而加强。通过上述基因的调控, 可能加强 caspase-3的表达, 进而引起细胞凋亡。LeeJH等[ 4]研究发现白英正己烷部分对 LLC细胞有细胞毒性作用, 作用于细胞后可见 DNA片段、细胞凋亡特征 ,如染色质浓缩 、凋亡小体 ,也能显着 增 加 亚 G1 峰, 活 化 caspase-8, caspase-9 和caspase-3蛋白 ,裂解多腺苷二磷酸多聚酶 (PARP)。此外 ,白英正已烷部分还可增加细胞外信号调节激酶(ERK), 瞬时激活磷酸化 c-Jun氨基末端激酶(JNK), 下调磷酸化 p38 MAPK。这些研究结果显示, 白英的正己烷部分通过 caspase活化作用和影响MAPK进程来体现抗肿瘤功能 。LiuHR[ 19]在白英总皂苷诱导人宫颈癌 Hela细胞的凋亡研究中, 发现它可激活各种各样的半胱氨酸蛋白水解酶 ,如 caspase-3、caspase-8和 caspase-9,而使用 caspase抑制剂 Z-VAD-FMK可以阻断白英总皂苷引起的细胞凋亡 。例如阻断 Caspase-3后可观察到超过 80%的细胞存活 。说明白英总皂苷诱导细胞凋亡涉及多个途径 ,包括死亡受体和线粒体途径 ,此外, 白英总皂苷还可提高 Bax:Bcl-2在宫颈癌细胞中的比例 。有力地表明, 线粒体通路是通过减低 Bcl-2的表达和上调 Bax的表达 , 释放细胞色素 C,激活 caspase-3等下游事件 , 从而导致细胞凋亡的 [8]。

（三）促进肿瘤细胞死亡

细胞死亡的方式通常为凋亡和坏死, 凋亡细胞因为始终有细胞膜的封闭,因此没有内容物的释放,而坏死细胞由于细胞膜破裂 ,细胞内容物大量流出。乳酸脱氢酶 (LDH)是存在于所有细胞中的一种稳定的酶, 当细胞破膜坏死时会迅速释放到细胞外 ,造成细胞质内 LDH减少 ,而培养液中的 LDH增加 ,因此 LDH漏出率是细胞坏死与否的重要标志, 漏出率越大说明细胞膜通透性越高 ,细胞坏死越严重。白英甾体皂苷组分处理细胞后 ,用紫外分光光度法测试人卵巢癌 SKOV3的 LDH漏出率, 结果发现白英甾体皂苷组分 7.8、12.4、19.7 μg/mL组在48、72小时的 LDH漏出率明显高于正常组 (P<0.01), 3 μg/mL组 LDH漏出率在 48小时与空白组比无明显差异 (P>0.05),在 72小时有较明显升高(P<0.05)[ 9]。证明白英甾体皂苷组分能引起肿瘤细胞的坏死 ,具有良好的抗肿瘤作用 。

（四）干扰细胞周期

细胞周期涉及一个真核细胞的一系列活动, 包括生长刺激、复制和分裂。许多抗癌治疗最初都是根据细胞的遗传背景以及治疗作用方式来干扰细胞周期、阻断分裂时相。白英甾体皂苷组分能显著抑制人卵巢癌 SKOV3细胞的体外增殖, 诱导细胞凋亡[ 21]。通过流式细胞仪检测细胞周期, 发现 G 1 、S期细胞较空白组明显升高, G 2 期细胞明显减少 , 说明细胞阻滞于 G 1 、S期, 进入分裂期的细胞减少 , 细胞增殖受到抑制 。余氏等[ 22]发现随着白英提取液浓度的升高, G 0 /G 1 和 G 2 /M期的细胞数明显减少 ,DNA合成期(S期 )细胞数均明显增多 ,表明白英提取液使胃癌 SGC-7901细胞发生 S期阻滞 ,从而抑制细胞增殖[10]。

（五）免疫增强作用

机体的免疫系统具有限制肿瘤细胞生长能力 ,机体的免疫功能状态随着肿瘤的不断生长而进行性的下降 。大量研究证实中药抗肿瘤的主要机制之一是增强机体免疫功能 。白英提取物具有一定的免疫调节作用。谢氏等[ 23] 采用各项免疫学活性测定表明 ,白英提取液能有效地增加正常小鼠的脾淋巴细胞转化率 ,增强小鼠迟发型变态反应、NK细胞活性、抗体形成细胞活性、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率, 且随提取物溶液浓度增高而增强。提示白英提取物所发挥的抗肿瘤机制之一可能是通过提高机体某些免疫功能达到的。白英提取物还能降低正常和白血病小鼠的 CD3和 Mac-3的表达 ,促进正常小鼠 CD19和 CD11b的表达, 而 CD11b在白血病小鼠显示对 T细胞前体的抑制和对巨噬细胞和 B细胞的促进[ 24]。白英提取物还可增强巨噬细胞和 NK细胞活性 , 显示白英提取物可能是一个强有力的免疫反应剂[11]。

（六）抗氧化作用

机体许多疾病的发生、发展均与自由基对机体损伤有关。过多的自由基能诱发癌症, 抗氧化防御能阻止潜在的自由基的毒性作用。研究发现白英提取液或 VitE均可明显降低无损伤小鼠血清、肝 、肾组织中脂质过氧化产物 (MDA)的含量及增加超氧化物歧化酶 (SOD)活性和小鼠血清过氧化物酶(POD)的含量 ,说明白英提取物具有明显的抗脂质过氧化作用[ 12]。其抗氧化机制可能是通过增加POD、SOD的活性, 加快体内自由基的清除 , 抑制肝脏内过氧化脂质的二级分解产物 MDA的含量 , 从而起到保护细胞免受过氧化损伤的作用 。2.7　 与其他中药联合治疗肿瘤养正消积胶囊是在中医络病理论指导下研制的一种抗肿瘤的中药复方制剂,由黄芪 、女贞子 、莪术 、人参 、灵芝 、绞股蓝 、土鳖虫、白术 、白花蛇舌草 、白英、半枝莲 、舌莓 、茵陈、鸡内金等组成, 在治疗恶性肿瘤方面 ,认为脾肾亏虚为发病之本 ,热毒滞络、络息成积为主要病机 , 以 “健脾益肾 , 化瘀解毒 , 散结通络 ”立法, 扶正与祛邪并用 , 标本兼顾 , 用于恶性肿瘤及放化疗患者 ,收到良好疗效 。薛氏等[ 13] 检测治疗前后患者血清的胃蛋白酶原 (PG),发现治疗后血清 PGI、PGII明显低于治疗前, 说明养正消积胶囊在修复胃黏膜 ,提高免疫力, 促使胃黏膜不典型增生向正常黏膜逆转有一定的作用[14]。

3结论与展望

目前的研究表明白英提取物或其有效成分可通过抑制肿瘤细胞生长 、诱导细胞凋亡 、免疫调节、抗氧化等作用抑制肿瘤生长 ,但对于白英抗肿瘤作用的研究尚有许多问题需要进一步阐明 , 例如对于其药效物质 ,尤其是具有抗肿瘤作用的有效成分及其机制尚缺乏系统深入的研究, 白英药效成分的体内药动学研究也未见报道 。进一步明确白英的抗肿瘤成分及作用靶点将是该类研究下一步发展的方向。在临床上加强联合用药的研究, 则会更好发挥其抗肿瘤作用 ,也为晚期癌症患者 , 特别是失去手术、放疗条件及不能接受化疗的患者带来一种简便而有效的治疗手段。白英作为一种常见的抗肿瘤中药 ,价格低廉 、疗效确切[15]。随着研究工作的不断深入, 结合传统中医药的临床经验 ,相信在白英的开发和应用方面会取得更大的进步 ,并有可能成为继羟基喜树碱等中药之后的又一重要的抗肿瘤药物。

参考文献：

[ 1]南京中医药大学.中药大辞典[ M] .上海:上海科学技术出版社,2016.

[ 2]张秀娟, 马悦.白英的药理作用研究进展[ J] .亚太传统医药,2018, 4(1):55 -56.

[ 3]孙立新, 任靖, 王敏伟, 等.白英抗肿瘤活性部位筛选[ J] .沈阳药科大学学报, 2015, 22(3):210-213.

[ 4] LeeJH, LeeYH, LeeHJ, etal.Caspaseandmitogenactivatedprotein

kinasepathwaysareinvolvedinSolanumlyratumherbainducedap-optosis[ J] .Journalofethnopharmacology, 2009, 123(1):121 -127.

[ 5]李瑞玲, 赵艳玲, 张敬华.白英化学成分研究现状[ J] .天中学刊,2017, 24(2):23 -24.

[ 6]任靖, 冯国楠, 王敏伟, 等.白英总苷抗肿瘤作用初步研究[ J] .肿瘤防治研究, 2016, 33(4):262-264.

[ 7]刘淑华, 魏仙凤, 白美姣.白英甾体皂苷对肿瘤细胞的体外增殖抑制作用[ J] .江西中医药, 2016, 41(1):71-73

[ 8]王筠默.中药研究与临床应用[ M] .上海:上海中医药大学出版社, 2006:12.

[ 9] LeeYY.Twonewsoladulcidineglycosidesfrom Solanum lyratum.Chemical＆amp[ J] .pharmaceuticalbulletin, 1997, 45 (8 ):1381-1382.

[ 10] RenY, ShenL, ZhangDW, DaiSJ.TwonewsesquiterpenoidsfromSolanum lyratum withcytotoxicactivities[ J] .Chemical＆amp;pharmaceuticalbulletin, 2009 , 57 (4 ):408-410.

[ 11] 韩重, 黄霁, 何珉, 等.白英抗肿瘤成分提取工艺的研究 [ J] .中草药, 2006, 37(10):1500 -1502.

[ 12] 孙立新, 任靖, 王敏伟, 等.白英水提物抗肿瘤作用的初步研究[ J] .中草药, 2006, 37(1):98 -100.

[ 13] 朱海静, 王开平, 王瑞.白英抗肿瘤作用的实验研究 [ J] .科学技术与工程, 2009, 9(9):2304 -2306.

[ 14] 韦星, 涂硕, 万福生, 等.白英乙醇提取物诱导人肺癌 SPC-A-1细胞凋亡的实验研究[ J] .中国药房, 2008, 19(4):256-258.

[ 15] 韦星, 李朝敢, 农嵩, 等.白英提取液对 Hela细胞凋亡及 P53和bcl-2蛋白表达的影响[ J] .右江民族医学院学报, 2006, 28(5):714-717