葛根芩连片的含量测定研究进展(一)

目录

一、 葛根芩连片的简介 2

二、 葛根芩连片中葛根素的含量测定实例 2

（一） 薄层扫描法 2

（二） 高效液相色谱法 3

（三） 小结 3

三、 葛根芩连片中盐酸小檗碱的含量测定实例 3

四、 葛根芩连片中黄芩苷的含量测定实例 4

（一） 间接竞争酶联免疫分析(ELISA)法 4

（二） 高效液相色谱法 4

五、 总结 5

参考文献 5

一、葛根芩连片的简介

葛根芩连片来源于《伤寒论》中的葛根芩连汤，由葛根、黄芩、黄连、甘草等4味药材加工制成,方中以葛根为主，既能清热解表，又能升发脾胃清阳之气而治下痢；辅以黄芩、黄连苦寒之品以清胃肠之湿，使以甘草清热解毒，调和诸药，功能为解肌,清热,止泻,止痢。用于泄泻痢疾,身热烦渴,下痢臭秽。目前葛根芩连制剂有片、丸（微丸）、胶囊、颗粒 4 种剂型，而葛根芩连片是生产厂家最多，临床应用最广的剂型。葛根芩连片的化学成分众多，但 4 味中药化学基础均较清楚：葛根的主要活性成分为大豆苷、大豆苷元、葛根素等黄酮类和皂苷类化合物；黄芩的主要活性成分为黄芩苷元、黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素等黄酮类化合物；黄连的主要活性成分为小檗碱、巴马汀、黄连碱、药根碱、表小檗碱等生物碱；甘草的主要活性成分为甘草酸、甘草次酸、甘草苷、甘草苷元等皂苷类和黄酮类化合物。

二、葛根芩连片中葛根素的含量测定实例

《中国药典》中药材和中药制剂的质量控制基本都采用薄层色谱法、高效液相色 谱法（HPLC）、紫外分光光度法等方法测定中药材和中药制剂中的有效成分（指 标性成分）。葛根芩连制剂中葛根素的含量测定方法有薄层扫描法、高效液相色谱法（HPLC、RP-HPLC）、紫外分光光度法、毛细管电泳法、近红外光谱法、酶联免疫吸附测定法、超高效液相色谱法等。然而对葛根芩连制剂的整体质量控制的研究多集中在葛根芩连汤上。本文搜集了几种较为典型的对葛根芩连片中葛根素含量测定研究进展。

（一）薄层扫描法

宋金荣等人选用薄层扫描法，以硅胶为固定相，氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(14:6:3:1)为流动相，参比波长为370nm，测定波长254nm，最终可知葛根素在0.5-2.5μg范围内呈良好的线性关系 (r=0.9992)，平均回收率97.99%，RSD为2.10%。

秦文清的TLCS法实验中用乙酸乙酯:甲酸:水(8:1:1)为展开剂，采用单波长反射锯齿扫描,入=275nm,Sx= 3。结果:线性范围在0.38-3.8ug,r=0.9993平均回收率为96.87%。

值得注意的是，两次实验人员均选用了结构及最大吸收波长与葛根素相近的芦丁作内标,能减少提取、点样、展开过程及仪器带来的误差,还可以克服板间误差,样品测定时,同板点对照品与由标准曲线求得的结果基本一致。两次实验中的共同点还有一点即本品片剂是葛根和其它组分的水煎或乙醇提取物浓缩稠膏与少量葛根细粉的制剂，由于乙醇溶解能力强，能提取多种成分，宋金荣在实验中用乙醇为提取溶剂，将乙醇提取液水浴蒸干，用水饱和的正丁醇多次提取，使葛根素与其他不能溶于正丁醇的成分得到了有效的分离，使层析展开时能达到良好的分离效果，葛根素斑点分离效果良好，不受其他斑点干扰。在这次实验中，实验人员曾采用乙酸乙酯作为提取溶剂，索氏提取器回流5h，依法测定，结果回收率仅为83.46%，说明乙酸乙酯不能将葛根素完全提取出来，不宜作为葛根芩连片中葛根素的提取溶剂。同时秦文清采用乙醇水溶回流Ih,用定性实验表明其使葛根细粉中的葛根素提取完全。

（二）高效液相色谱法

李向阳,李振国则用HPLC对含量测定的色谱条件、测定范围、样品测定条件等进行了验证。实验可知李向阳等人采用的色谱条件如下：色谱柱为HypersilC18柱（4.6mm×250mm,5μm),柱温40℃;进样量5μL,甲醇-乙腈-水(6:9:85)为流动相,流速1.0mL/min，检测波长为250 nm，理论板数按葛根素计算不低于2000。按此测定,葛根素的保留时间为11.8min。葛根素在0.0776-0.7760μg呈良好的线性范围(r=0.99997);平均回收率为101.02%,RSD为2.91%。

谭生建等人选择的话实验条件分别是：流动相:甲醉-水(23:77);流速:1.0ml/min;色谱柱温度:35℃;检测波长:250nm;进样体积10μl;外标法计算含量。理论板数按葛根素峰计算不低于2000;葛根素浓度在5μg/ml-80μg/ml范围与色谱峰面积呈线性关系;R=0.9999;回收率及RSD分别是97.6%、1.8%。

在《中国药典》 2005年版一部中粉葛药材含量测定项下供试品溶液的制备方法为30%乙醇加热回流提取。本品为葛根等药材经提取制成的中成药制剂,李向阳等人经过试验,用30%乙醇提取制成的供试品中杂质含量较高,连续进样易导致柱压上升、柱效下降。根据葛根素易溶于甲醇的理化性质,以甲醇为溶媒超声处理制备供试品溶液,制得的供试品色谱较为理想,重现性较好；谭建生曾用甲醇做提取溶剂,分别经水浴回流提取30、60和90min考察,确认60min可将葛根素提取完全,因此确定回流提取lh。在这些色谱条件下，供试品色谱中葛根素峰形对称,与杂质峰可达基线分离。其次样品液在室温下(约22℃)置棕色量瓶中,48h内葛根素含量无明显改变。

（三）小结