山楂中黄酮类化合物的测定方法概述 (5)(四)

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对于提取黄酮类物质，目前使用最多的是超声法[12]。其应用于山楂中黄酮的提取主要利用它的空化作用，就是一定频率的超声波作用于溶液的时候，溶液中尺寸适宜的气泡发生共振现象，其强烈的冲击波使得细胞壁破裂，有效成分会溶出。在综合考虑等可行性因素的情况下，超声波法明显优于其他的提取法，提取时间缩短，产率也比较高，而且实验可在室温下进行，设备简单宜操作，是提取黄酮类物质的一种有效方法

（四）山楂黄酮的分离纯化

1、热水提取法

水是最廉价的提取溶剂，是地球最丰富的物质，无色无味无毒，对人体和环境无害，挥发性不大，具有真正的绿色环保意义。但用水作为提取溶剂时，从中药材中提取的黄酮类化合物中杂质含量较多，往往因泡沫或粘液很多，给进一步分离带来许多麻烦，而且浓缩也会很困难。此外，水提取物容易发霉发酵。

2、碱性水、碱性稀醇浸提法

中草药中黄酮类成分多为多酚类化合物，因其结构中具有酚羟基，故可用碱性水或碱性稀醇液来提取中草药中的黄酮类化合物。黄酮母核的多样性主要是由黄酮本身骨架、环系的变化、氧化程度和数量而定，当碱的浓度过高，加热时便破坏黄酮类化合物的母核。

3、有机溶剂热回流及冷浸提取法

根据杂质极性不同，可选用不同的有机溶剂(如石油醚、乙酸乙酯、氯仿、乙醇、甲醇、丙酮等)，一般采取乙醇为提取溶剂。

4、超过滤法

超过滤是一种能够将溶液进行净化、分离、浓缩的膜分离技术，对水溶性离子无法滤过，一般是利用进水压与出水压差来判断超过滤膜是否有效，与活性碳类似，能大大提高黄酮类物质的提取纯度，并且在提取生产过程中可以减少废水排放。

5、酶解法

酶解法对于一些黄酮类物质被细胞壁包围不易提取的原料比较实用。其原理是用相应的酶充分破坏以纤维素为主的细胞壁结构及其细胞间相连的果胶，使植物中的果胶完全分解成小分子物质，减少提取的传质阻力，使中草药植物中的黄酮类物质能充分释放出来。

（五）黄酮类化合物的分析与鉴定

黄酮类化合物的结构鉴定

1、纸色谱（PC）：

1）适用于分离各种天然黄酮类化合物及其苷类的混合物。

2）混合物的鉴定常采用双向色谱法。医学教|育网搜集整理

3）同一类型苷元，Rf值依次为：苷元>单糖苷>双糖苷。

2、硅胶薄层色谱：

1）适用于分离与鉴定弱极性的黄酮类化合物。

2）分离黄酮苷元常用的展开剂是甲苯-甲酸甲酯-甲酸（5：4：1）。

3、聚酰胺薄层色谱：适合于分离含游离酚羟基的黄酮及其苷类。

黄酮类化合物的基本结构构成为C-C-C方式，广泛存在于包括众多植物中，属于植物次级代谢产物。黄酮类化合物具有来源广、生物活性多、毒副作用小等特点，目前广泛应用于临床，古味伍绛木樨茶对其药理作用进行分析如下。 1 心血管系统作用 1.1 抗心律失常作用

动物实验表明，黄酮对心肌缺血再灌注损伤组织，可以有效地减少其心律失常发作次数，减轻发作频率，能对抗乌头碱、哇巴因和氯仿诱发的心律失常，其可能的机制为总黄酮可降低心室肌动作电位幅值（APA），延长动作电位时程（APD）。

1.2 抗动脉粥样硬化

动脉粥样硬化（AS）疾病进程的一个主要原因为，低密度脂蛋白（LDL）的氧化修饰，黄酮类化合物具有抑制LDL氧化作用，抗平滑肌增殖，清除自由基，从而有效地对抗动脉粥样硬化的损伤。

1.3 扩血管作用总黄酮具有血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）的作用，抑制血管内皮素（ ET）的生成，扩张冠脉血管，改善心肌的血氧供应，对心血管系统起到改善作用，从而起到血管扩张的作用。

1.4 抗凝血作用总黄酮体外给药可抑制花生四烯酸和胶原纤维引起的血小板聚集作用，改善血液流变性，延长凝血酶原时间。动物试验表明，大鼠皮下注射大剂量肾上腺素和冰水浸泡法，造出急性血瘀证大鼠模型，即血流变性呈轴稠状态的实验动物，通过饲喂山楂叶总黄酮（HLF），可显著降低红细胞（RBC）聚集指数、血浆比轴度，从而改善血瘀状态。银杏黄酮单独应用其抗凝作用不如蚓激酶，两者合用后抗凝效果加强，但溶栓作用并没有改善。

1.5 抗血脂作用维生素D3加脂肪乳剂造成大鼠高脂血症模型，在给予了麦胚总黄酮类后，可显著提高大鼠高密度脂蛋白胆固醇含量，降低实验性血清总胆固醇和三酚甘油含量。

2 抗炎调节免疫作用

黄酮类化合物具有显著的抗炎作用。作用机理为作用于细胞正常的有丝分裂过程，调节细胞间相互作用的分泌过程，抑制肥大细胞和嗜碱性细胞释放慢反应致炎物质，如中性粒细胞溶酶体酶、白三烯、组胺、前列腺素等，调节巨嗜细胞的吞噬功能，从而直到抗炎和免疫调节的作用。穿卜草中分离得到黄酮提取物可显著清除炎性因子，鸡蛋清致大鼠足肿胀、醋酸所致的小鼠腹腔毛细血管通透性增加、二甲苯所致的小鼠耳肿胀等急性炎症反应，都有明显的抑制作用。 3 抗菌抗病毒作用

3.1 抗菌作用甘草黄酮提取物在体外，可有效抑制白色念珠菌、黑根霉、灰葡萄抱、意大利青霉等真菌。同时对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、新型隐球菌、枯草杆菌、绿脓杆菌、烟曲霉菌、白色念珠菌等均有抑制作用，亦能明显抑制的生长。

3.2 抗病毒活性黄酮类化合物对多种病毒具有抑制作用，芦丁能抑制流感病毒、脊髓灰质炎病毒。黄芪总黄酮对人疤疹病毒（HSV21）感染的豚鼠皮肤，具有较好的抗病毒治疗效果。异黄芪282甲醚能显著抑制流感病毒。总之黄酮类对于流感病毒、呼吸道合胞病毒、脊髓灰质炎病毒、疤疹病毒、登革热病毒、腺病毒、肝炎病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒等都具有一定的抑制作用。

3.3 抗HIV活性许多黄酮类化合物均有抗匀陨灾活性，其作用的靶点均分别为作用于HIV逆转录酶、HIV蛋白酶、HIV整合酶，作用于HIV启动子，没有明确作用点的黄酮类化合物等。其中黄芩素可对抗中逆转录酶。

三、山楂中黄酮类化合物的测定方法

一、利用紫外光谱测定黄酮类化合物的结构

大多数黄酮类化合物在甲醇中的紫外吸收光谱由两个主要吸收带组成。出现在300～400nm之间的吸收带称为带Ⅰ，出现在240～280nm之间的吸收带称为带Ⅱ。不同类型的黄酮化合物的带Ⅰ或带Ⅱ的峰位、峰形和吸收强度不同，因此从紫外光谱可以推测黄酮类化合物的结构类型。

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