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大鼠血浆中华法林的药物动力学研究(三)
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查看 大鼠血浆中华法林的药物动力学研究
图 3.3 空白血清加样色谱图(10μg/mL)
图 3.4 口灌给药5h色谱图
在本研究中选定的柱子、流动相比例、流速、监测波长下,药物华法林峰与杂质峰明显,分离效果良好,通过比较华法林标准品样品、空白血清样品、空白血清添加华法林样品、大鼠口灌给药5h血浆的色谱图,结果表明在华法林(峰1)相应保留时间处均无干扰峰出现,其保留时间为5.898 min。
(二) 色谱分析条件的优化
本试验在前期血浆建立方法过程中,根据文献的报道,本研究曾采用混合有机试剂(二氯甲烷:正己烷=9:1)萃取药物,实验结果浓缩后灵敏度可以显著提高,但实验过程中发现华法林是以钠盐的形式存在的,水溶性较强,难以溶解到非极性的有机试剂中。
(三) 标准曲线制备
在本提取方法和色谱条件下,华法林浓度和样品的峰面积做线性回归,华法林浓度范围从0.01-10.0 mg/L,线性关系良好,血浆标准曲线方程为Y= 11438X + 127.41(r=0.9999)并得出斜率、截距以及相关系数。标准曲线图如下:
图3.5 华法林在大鼠血浆中标准曲线图
(四) 回收率和精密度
表3.1 大鼠血浆中华法林钠的回收率和精密度(n=5)
添加浓度(mg/L)
回收率 (%)
精密度(%)
日内 日间
血清
0.1
96.48±6.28
1.78 6.51
1.0
108.28±10.58
1.03 9.76
10.0
98.29±3.73
0.94 3.79
在设计的提取方法和检测条件下,华法林在血清中的绝对回收率达90%以上,日内变异系数(日内精密度)小于5%,日间变异系数(日间精密度)小于10%,说明该药物在大鼠血清中回收率较好,精密度符合检测标准(结果见表1)。最低检测限为0.01mg/L,完全满足血浆中华法林钠的定量分析。
(五) 血清中华法林药物动力学参数计算
将不同采样时间点血清中华法林峰面积代入曲线方程中,所得血药浓度,利用血浆中药物浓度与采样时间绘制药物浓度——时间曲线(见图2.3),利用3P97药物动力学软件(中国药理学会数学药理学专业委员会编制)计算大鼠口灌华法林后的药物动力学参数(见表2)。
图3.6 不同组大鼠血清中华法林血药浓度-时间曲线图
表3.2 大鼠血清中华法林药物动力学参数(n=6)
参数
华法林
华法林+血栓通
剂量(mg/kg)
0.2
0.2
房室模型
有吸收一室模型
有吸收二室模型
吸收速率常数
0.70±0.082
0.33±0.037
分布速率常数
/
0.17±0.033
消除速率常数
0.029±0.0038
0.046±0.0039
吸收半衰期
1.01±0.12
2.11±0.23
分布半衰期
/
4.23±0.91
消除半衰期
23.63±3.21
15.34±1.36
达峰时间
4.79±0.82
5.68±0.34
达峰浓度
0.37±0.041
0.47±0.046
药时曲线下面积
12.92±0.71
11.67±0.51
总体清除率
0.15±0.019
0.016±0.0033
表观分布容积
0.44±0.036
0.29±0.037
法林独立用药组和华法林联合血栓通用药组,两组的药物浓度——时间曲线大致走向一致,但一些特征还是有细微差别,独立用药组的达峰时间要早于联合用药,但其达峰浓度要低于联合用药组。单独给药组还出现了双峰现象。通过对比单独给药组和联合给药组的动力学参数:单独给药组的吸收速率、总体消除率、表观分布容积、消除半衰期都要高于联合用药,但消除速率常数、吸收半衰期、达峰浓度、达峰时间要低于联合给药组。
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