大鼠血浆中华法林的药物动力学研究(一)

目录

一 引言 1

二 材料与方法 2

（一） 试剂与仪器 2

1 药品与试剂 2

2 实验动物 3

3 实验仪器 3

（二） 试验方法 3

1 色谱分析方法 3

2 血浆样品的处理与制备 3

3 标准曲线制备 4

4 方法回收率和精密度 4

5药物动力学研究 4

三 结果 5

（一） 色谱图及特异性分析 5

（二） 色谱分析条件的优化 6

（三） 标准曲线制备 7

（四） 回收率和精密度 7

（五） 血清中华法林药物动力学参数计算 8

四 讨论 9

（一）华法林HPLC检测方法 9

（二）华法林华法林药代动力学 10

五 结论 10

参考文献 11

一 引言

 

   华法林是20世纪40年代上市的双香豆素口服抗凝药，由美国Wisconsin大学研究并合成的化合物，其化学结构为3-（a-苯基丙酮）-4-羟基香豆素。华法林是通过抑制羧基化酶发挥其抗凝作用，凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的谷氨酸需要羧基化转变为γ-羧基谷氨酸后才能结合到磷脂表面，发挥使血液凝固的过程加快速度的作用。其作为维生素K依赖性因子，整个γ-羧基化的进程需要还原型维生素K的参加。华法林的作用就是使维生素K环氧化物还原酶的活性降低，使得还原性维生素K的不能生成。正是因为这种抗凝机理使得华法林对已经在体内生成的凝血因子并无抗凝的作用，只有等到原有的凝血因子全部经过代谢消耗完了之后，才能发挥抗凝效应。因为华法林的自身的抗凝原理的限制，所以其起效相对缓慢，仅在体内有效不可作为体外抗凝剂使用，停药后也需要等到维生素 K 依赖性因子逐渐恢复到一定浓度后，抗凝作用才消失，所以其药效持续时间较长。华法林的药效要明显优于阿司匹林，但起效时间明显慢于肝素且不能体外使用。   

   随着我国经济的快速发展，人均收入显著提高的，人们在饮食上追求更加精细且经常大鱼大肉，我国有心血管疾病患者越来越多，华法林的因其疗效显著、作用时间持久同时作为口服药服用方便、价格低廉而广泛应用于心脏人工瓣膜置换术后的治疗[1]，是我国目前抗凝治疗最常用使用的口服抗凝血药。虽然是目前最普遍的口服类型抗凝药，但其也存在许多不足的地方[2]，如中毒剂量与有效治疗剂量相接近治疗窗小，而且即使是相同的剂量个体的反应完全不相同，同一个体在每个时间段所需的药物剂量都可能不相同，所服的剂量稍微多一点过多或者少一点点，都极易出现血栓或者出血的现象[3]。最重要的是，影响华法林发挥药效的因素很多。遗传基因的差异、个体自身的差异、其他药物的相互作用等都会影响药效。不地区、不同肤色的人群对华法林的敏感性有较大的差异，目前许多国际研究机构都对华法林的基因影响因素进行研究，研究认为VKORC1及细胞色素P450酶 2C9(CYP 2C9)的基因多态性导致华法林剂量的个体差异[4-9]，并得出个体化的用药剂量公式 。华法林个体差异在患者中更大。营养不良、腹泻、呕吐、手术创伤、低蛋白血症等疾病因素[10]，使患者对华法林的敏感性增加以致华法林抗凝作用增强，而胃病或者不恰当的饮食习惯则会影响华法林的吸收或者抵消华法林的作用。许多药物与华法林的相互作用都能引起华法林在个体体内的吸收与代谢清除的差异[10-11]，华法林作为口服药主要通过消化道迅速吸收，几乎完全通过肝脏代谢清除。消胆胺等药物影响胃肠道对其的吸收、代谢清除影响药效学；华法林作为羧基化酶的抑制剂，具有较强的抗凝作用，当然与其他一些具有抗凝作用药物联用时势必会增加抗凝的强度，增加华法林的出现出血并发症的概率，例如非甾体类抗炎药和阿司匹林、高剂量盘尼西林。在众多的药物中要尤其关注阿司匹林，因为阿司匹林作用时间长且在临床中被广泛应用[12-13] 。因此为了预防出现不良反应，医生在使用华法林的时候要注意药物的配伍，要考虑到其他药物是否会增加华法林的血药浓度，必须十分精确的控制华法林的剂量，同时对患者使用华法林之后进行密切监测，避免并发症出血的发生。

   目前医生主要通过凝血酶原时间( prothrombin time,PT)和国际标准比值( international normalizedratio ,INR)[14]对华法林进行抗凝作用效果的监测，INR值是PT值经过国际敏感指数( international sensitivity index , ISI) 校正后的数值。凝血酶原时间是心脏机械瓣膜置换术后抗凝监测中应用最早的的监测方法，因其使用方便、快速得以迅速推广成为华法林抗凝监测的基础方法。该方法的不足也十分明显：使用的受试剂对结果的影响很大，因此其的参考性就较差，容易出现抗凝治疗失误导致抗凝过度。INR因为消除了PT检测中的一些不足，其数据更加合理，所以IRN得到了迅速推广[14]。近年来, 医生通过监测患者服用药品的INR 值来指导和调整华法林的剂量，但由于其数值本身的存在一定的局限性、患者的个人差异较为明显，同时患者在服用药物后与医生的信息交流不及时，出现出血等并发症的情况时有出现 [15] 。

   目前国内外对心脏瓣膜置换病人的华法林应用颇感兴趣[14、16]，尤其是初始剂量的合理性多有研究，但是临床医生对华法林的了解、掌握的程度并不够，而且华法林钠的使用说明书上出血并发症的出现率为8%。因此存在医生过于担心患者服用华法林后导致出血，而拒绝给予患者华法林治疗的现象。在患者初期使用华法林的剂量是难以把握的，也是最难监测的阶段，目前华法林的抗凝监测主要是通过PT和INR，但是在服用华法林的初期PT和INR的值变化不显著，PT和INR值真正完全反映华法林的抗凝作用要在其服用72个小时后。如果在抗凝初期过于相信INR极有可能会出现抗凝过度出血的情况[16-17]。因此研究体内的血浆中华法林的药学动力学，探明华法林在人体内的分布代谢情况对于华法林的初始剂量的大小的探究很有价值，开发一种简便、快速、灵敏、准确、稳定、不受干扰和足够容易地在医院实验室进行的的高效液相色谱（HPLC）检测方法，用于监测抗凝治疗患者华法林血药浓度水平，同时与PT及INR等抗凝监测指标结合[18]，有利于提高抗凝监测的准确性，减少抗凝并发症的发生，指导临床医生合理调整给药方案，使患者的血浆中华法林的浓度处于一个相对安全有效的值，将该值与INR值相结合，判断华法林真正的抗凝强度，提高华法林的安全性，使其浓度在治疗窗之内，减少不良反应以及并发症的发生率。