大鼠血浆中华法林的药物动力学研究(四)

四 讨论

（一）华法林HPLC检测方法

   华法林是双香豆素类口服抗凝药，水溶性较好，口服经胃肠道迅速吸收且吸收完全，少部分在肝脏被代谢，进入人体血循环的原形药量几乎没有减少。正是因为其使用方便、生物利用度高等优点，华法林成为了目前临床上使用最频繁和广泛的口服抗凝药物。我国有较多心血管疾病患者，华法林作为心脏瓣膜置换术后的长时间抗凝药物，在长期的抗凝治疗中其抗凝效果是十分明显的，但华法林的临床应用缺陷也是很突出的：个体差异大、治疗指数小、影响因素多等问题，剂量不足或者过量都会出现严重的问题，出血是华法林不良反应中最严重的反应。目前医生对患者使用华法林后的抗凝效果监测的手段主要是PT以及经过校正之后的INR，但是PT和INR仅仅是一种定性的手段, 其数值的大小反应的是维生素 K 依赖因子Ⅱ、Ⅶ 、Ⅸ 、Ⅹ在该时间点其活性水平变化的总和，并不能完全体现此刻人体血浆中华法林含量的多少[21] ，有研究表明特别是在用药初期PT和INR值与华法林血药浓度没有线性关系，所以有时会出现虽然监测患者的PT值和INR都在正常值范围以内但还是出现例如出现牙龈出血类似的出血症状，特便是在患者刚开始用药的初期会出现类似的情况。本研究建立的检测华法林血浆浓度的高效液相色谱（HPLC）检测方法，在本实验选定的提取方法、流动相的配制，洗脱液的流速，检测波长等条件下，从图谱中可以明显的看出药物华法林峰旁边没有杂质峰（与杂质分离良好），出峰时间也较快；回收率实验结果也表明药物在大鼠血清中回收率较好达到95%以上；稳定试验结果表明在设定的条件下实验稳定性较好、重复性高，日内变异系数（日内精密度）和日间变异系数（日间精密度）分别小于5%、10%，完全满足血浆中华法林钠的定量分析。在整个实验过程中在操作上并没有遇见难题或者难以掌握的，说明该方法对于实验人员是非常简单易操作，同时回收率试验、稳定性试验以及出峰情况都表明该高效液相色谱（HPLC）检测方法是简便、快速、灵敏、准确的。目前大部分医院的实验条件也可以满足该检测方法的实验要求且实验操作也相对简单、快捷。为了PT及INR值的准确性和科学性，利用该方法进行血浆华法林浓度的检测，与其他两个基础指标共同分析患者的情况，可以指导临床医生合理调整给药方案，减少抗凝并发症的发生。

（二）华法林华法林药代动力学

目前国内外关于血浆华法林浓度检测方法建立的研究相对较多，但后续进行华法林药物动力学的研究并不大多。正是关于华法林药物的动力学研究的相对匮乏给医生指导患者合理用药造成一定的影响。本课题在上述研究背景下，通过建立的高效液相色谱（HPLC）检测方法[22]，并应用于华法林在大鼠血浆中的药物动力学研究[23]。首先华法林单独给药组的华法林血药浓度-时间曲线图出现双峰的现象的原因可能有两个：第一种可能性是华法林给大鼠灌胃，但药物在胃中排出并不是一次性的，可能会分成几次排出造成药物到达小肠的时间不一样，小肠吸收药物的次数变为两次，出现双峰现象；第二种可能性是药物的肝肠循环，华法林经胆汁或部分经胆汁排入肠道，在肠道中又重新被吸收，经门静脉又返回肝脏，这也是造成双峰现象的一种可能性；也有可能是两种情况共同造成出现双峰的现象。比较华法林独立用药组和华法林联合血栓通用药组，两组的血药浓度曲线大致走向一致，但还是存在明显差异，联合用药的大鼠血浆中华法林的达峰浓度明显高于华法林单独用药，根据这里的表观分布容积主要是中央室的分布容积，因为联合用药比较适合用二室模型拟合。由于联合用药后总体的平均血药浓度较高，所以其表观分布容积小于一室模型（单独用药组）。清除率为单位时间内消除的表观分布容积，因此联合用药组的总体清除率也低于单独用药组，因为是“总体”清除率和“表观”分布容积，所以不可能为数学上的完整一致，而且药物动力学参数均是软件拟合的统计学概念，难以达到数学上的完全一致性，基本趋势保持一致即可。复方血栓通胶囊是由三七、黄芪、丹参、玄参四种中药组成胶囊，具备活血祛瘀，扩张血管，改善血循环的作用。联合用药组的AUC减小和Cmax增大，提示华法林与血栓通联用时有增大出血的风险[24]，因此在当华法林与其他药物合用时应加强治疗药物监测，特别是都具有抗凝血作用的药物[25-26]。 

五 结论

本研究建立了一种大鼠血浆中华法林简便、快速、灵敏准确的高效液相色谱（HPLC）检测方法，经检测表明，本方法适合用于大鼠血浆中华法林的定量检测，并将该方法应用于华法林在大鼠血浆中的药物动力学研究。研究发现华法林与血栓通联用时，华法林的药动学参数会受到血栓通的影响，联合用药组的AUC减小和Cmax增大，提示两药联用时，血栓通会提高华法林的暴露的概率，在用药初期患者的华法林血药浓度很可能会超过安全值，增大患者的出血风险，因此医生在临床上给患者使用华法林时应该更加注意与华法林具有相似作用的药物联用的情况，适当的调节剂量，并及时积极进行跟踪监测。

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